MATERIALISMO 

ILENIA BEATRIZ NAVA ZAMBRANO

Desde el inicio de la humanidad, se ha observado el constante uso de tecnicas e estregias desde la caza, pesca y recoleccion hasta el invento de artefactos que les permitian realizar estas funciones. Estas tecnicas fueron y en la actualidad siguen siendo  la base de  evolucion y mejoramiento de la sociedad, con cada avance y tecnica usada que poco a poco se fueron convirtiendo en tecnologias y no solo en ese sentido el humano se fue desarrollando, no solo a nivel de las cosas que obtenian sino los conocimientos que se fueron adquiriendo, y de alli su naturaleza para pensar cuestionar, hacer hipotesis, y actuar, sobre un problema un fenome, un nuevo descubrimiento. 

De todos esos hechos y conocimientos adquiridos, los pensadores comienzan a formular teorias, dan sus puntos de vista sobre la vida, de alli nace la corriente del pensamiento filosofico mecanicista con sus precursores aristoteles con sus datos en cosmologia, y como lo fue newton con teorias, manejo de las ciencias naturales, quien proporciona mucha informacion de la mecanica y el movimiento, viendo el universo siempre relacionando con las aciones  del comprtamiento humano, dando un estado de accion mecanizado y correlacionado, entonces se propone que las cosas cuantificables, descriptibles, regidas  por los principio de las leyes de la fisica, son lo real, en un sentido propone el descarte de entidades esperituales.

Segun Newton  "Una inteligencia que, por un instante dado, conoce todas as fuerzas por las quales la naturaleza es animada y la respectiva estructura de los seres que a componen, si por otro lado ella fuese bastante amplia para submeter esos datos a el analisis, abarcaria en la misma fórmula los movimentos de los mayores curpos del universo y los de los mas leves atomos; nada seria incerto para ella, y el futuro como el pasado estarian presentes a sus ojos. Todos los esfuerzos del espíritu humano tienden a  aproximarse sin cesar de esta inteligencia que nostros acabamos de concebir, y de la cual permanecerá siempre infinitamente apartado."

Se propondria un mundo con afinidad hacia una maquina, una sistematizacion  regida por las leyes de la mecanica, donde todo funciona por los principios de la cusualidad, la causa y el efecto, un encapsulamiento de los sucesos, esto propone una mayor facilidad de estudio reduciendo todo el pensamiento a solo lo existente, y categorizando su comportamiento de manera fisica. 

Solo que esto no es algo ciertamente aplicable a los humanos, o en si a la mente humana, al pensamiento, no existe una manera de encanjar nuestro razocionio que no es algo fisicamente palpable. 

En la biologia las conexiones nerviosas, y el funcionamiento del organismo se prodria decir que en cierto aspecto si obedece algunas de estas leyes, lo que sentimos en respuesta a las condiciones exteriores como los cambios de temperatura, el dolor, a traves del sentido del tacto, la absorcion de nutrientes son reacciones (efectos), en respuesta a en estimulador externo (causa), las celulas son pequeñas fabricas con una maquinara entera para mantener la vida, pero los pensamientos generados, el conciente, el subconciente son cosas que no van determinadas solo por la mecanica, no tendria sentido decir que el pensamiento es mecanizado, cuando es tan astracto y hasta el dia de hoy no se termina de comprender, muchos pueden inclusive verlo como algo que viene dotado de una fuerza superior, o de cosas mas espirituales.

Durante este analisis nace la dialectica, como contradiccion del mecanismo, enfoncando su analisis en lo existente y lo astracto, considerando la conciencia como parte del todo, reformando el pensamiento de una capsula mecanica, a englobar lo astracto, lo espiritual, los pensadores que se guiaron por esta linea del pensamiento fueron karl marx, engels, Friedrich, la integracion de la conciencia al mundo fisico, una vision objetiva del espacio, tiempo donde todo lo existe se encuentra determinado por estas dos cosas no hay nada fuera del tiempo, no entes que no pertenezcan al especio, la conclusion todo lo que no coexiste en estos terminos es absurdo siquiera pensarlo, algunos de estos pensadores hicieron criticas directas a la religion y la religiosidad.

Cuadernos filosóficos (1915) “La dialéctica como conocimiento vivo, multilateral (con el número de aspectos siempre en aumento), de innumerables matices en el modo de abordar, de aproximarse a la realidad (con un sistema filosófico qué, de cada matiz, se desarrolla en un todo): he aquí el contenido inconmensurablemente rico, en comparación con el materialismo 'metafísico', cuya desgracia principal es la de no ser capaz de aplicar la dialéctica a la 'Teoría de Reflejo', al proceso y desarrollo del conocimiento”.

El mundo de lo real lo que hace al hombre, lo que el hombre es, su felicidad y vida junto con sus conexiones con la naturaleza, no estan determinadas por entes fuera del espacio tiempo, cada accion es algo real, ver una conexion, una guia o a lo que llamaron autoconciencia, ver al hombre y sus intenciones como algo astro, fuera de los limites, no debe ser considerado, el hombre no es astracto forma parte de la funcionalidad, la reliosidad es algo que el hombre creo formo y reformo para su propio consuelo. El hombre comenzo a enmascarar sus miserias, a no afrontarlas, perdio la objetividad, la logica, justificando sus faltas a seres divinos.

La conciencia esta ligada a lo material, a la naturaleza, sus reacciones no podemos desligarla de las bases fundamentales de la vida, los descrubimientos cientificos, las leyes naturales, desde los atomos hasta las estrtucturas macromoleculares, forman parte del espacio-tiempo, todas se correlacionan el hombre esta integrado por estas bases fundamentales, el creacionismo lo supernatural, se hace a un lado, en su lugar se ponen las cuestiones cientificas, lo demostrable lo real, porque ¿que es dios?, no se tiene ninguna evidencia de su existencia, algunos proponen que tampoco se tiene ninguna evidencia de que no existe, si estas supociciones se ponen en un contexto logico,  el pensamiento se ve inclinado hacia no existe evidencia, no se puede comprobar, no tiene argumentacion, entonces no existe, no es tangible.

Y como la conciencia encaja en este contexto, se ve como un reflejo de las acciones del hombre, las sensaciones, las emociones, todas son consecuencias de una accion realiazada, apesar de ser algo astracto se considera como algo extrapolable, pasando a ser parte del espacio-tiempo parte de la realidad y de lo natural. 

 Otra propocion un poco mas mas dificil de comprender que tambien deriva del reduccionismo es el materialismo emergente una vision de este pensamiento se propuso en “Mente y Sociedad” (1989): “El materialismo emergentista afirma que las funciones mentales son funciones de ciertas partes del cerebro del vertebrado superior (mamífero o ave). No se puede desprender la mente del cerebro, del mismo modo que no se puede disociar el caminar de las piernas, la circulación sanguínea del sistema cardiovascular, la respiración de los pulmones, o la digestión del sistema digestivo. Lo que existe en realidad no es ni el órgano sin función, ni la función sin el órgano, sino el órgano funcionante. La digestión es la función específica del sistema digestivo, la circulación sanguínea la del sistema cardiovascular, y las funciones mentales son funciones específicas del cerebro, es decir, procesos que sólo el cerebro puede realizar. En suma, percibimos, aprendemos, pensamos, nos emocionamos y desvariamos con el cerebro. Sin cerebro vivo y despierto no hay mente.” 

Tambien conocido como la emergencia, trata de la coneccion mente y cuerpo, su relacion no solo espiritual si no tambien biologica, el cuerpo como ente biologico y natural pero tambien asume un poco la espiritualidad, llegando a comprender o explicar el alma como parte natural de la existencia, cuantificable, como una sustancia biologica, asumiendola como parte de los procesos bioquimicos y neurologicos. Por otro lado proponiendo la separacion de los pensamientos, sensaciones, y sentimientos de lo fisico y de las leyes fisicas, pero que aun asi es consecuencia de los mismos. 

Desde un punto de vista mas biologico como otros autores lo propusieron: Los cambios en la naturaleza, son muy variados y notables una extensa biota cambiante adaptable, darwin fue uno de los que noto, relato, y publico la nocion de estos cambios, una riquesa de especies naturales, que emergen de sus distintos cambios y adaptabilides, que tienen como principios fundamentales la mutacion, la presion ambiental, la seleccion natural “la supervivencia de los mas actos”, donde de un patron original se van derivando una cantidad de caracteristicas geneticas, que son sometidas a la seleccion, si la caracterista es favorable y el individuo logra reproducirse, es una caracteristica que pasara a la siguiente generacion, y permaneciendo asi dentro de la poblacion, si apartir de un fenomeno digamos fisico natural, como lo es una grita que impida el paso de los indivuos y las caracteriscas optenidas son mas beneficiosas en un lado que en el otro, estas van a permanecer en uno pero del otro seguramente desapareceran creando asi una nueva especie emergente. 

En si el materialismo a pesar de sus distintas visiones, o linajes puede comprender la conexion existente entre entre el cuerpo y la conciencia como un solo ente mateial en un plano fisico, y si hay existencia de algun espiritu seria conceptualizado como un espiritu fisico que conforma parte del engranaje natural o como mente y alma como entes separados de un cuerpo fisico coexistiendo en el espacio tiempo

Projeto engenharia genetica e terapia genica Reduccion de la Exprecion de Gluten a Través de la Supresion de Genes por CRISPR/Cas9 y ARNi de γ-gliadinas y ω-gliadinas, en Tritordeum 

Ilenia Nava Zambrano

Resumen 

El trigo es una planta perteneciente a la familia de las Poaceae e al género Triticum. Una planta de distribución y cultivo, a nivel mundial, es uno de los alimentos de mayor importancia y alto consumo en la población, que junto con el maíz y el arroz son los granos más producidos. La harina de trigo es uno de los ingredientes alimentarios más importantes y contiene varios nutrientes esenciales, incluidas las proteínas, como el gluten. El gluten es uno de los principales componentes proteicos del trigo y está formado por glutenina Además de variar según las especies en estudio, la importancia de conocer esta proteína es porque a ella se asocian un conjunto de enfermedades denominadas conjuntamente enfermedades relacionadas con el gluten o (GRDs) por sus siglas en inglés. Las cuales incluyen la enfermedad celiaca asociada a los genes HLA-QD2 y QD8, y las sensibilidades no celiacas. El objetivo de este estudio es la producción de una variedad de trigo que mantenga propiedades parecidas a las del trigo convencionalmente, con una expresión baja gluten a través de la edición y silenciamiento génico. También de la represión de los genes de las γ- y ω-gliadinas localizadas en el brazo corto de los cromosomas 1A, 1B y 1D, por las dos técnicas descritas CRISPR/Cas9 y ARNi en específico miRNA, para la obtención de trigos con un menor impacto toxicos para las personas que presentan sensibilidad del tipo celiaca y no celiaca. La transformación de las semillas del trigo se realizan mediante infecciones con Agrobacterium tumefaciens cargadoras de plásmidos recombinantes, y biobalísticas con las secuencias de miARN. Uno de los retos más grandes encontrados en la modificación de variedades de trigo por métodos de supresión de genes es la dificultad para identificar subunidades de G–BPM y gliadinas (complejo loci Glu–3, Gli–1). 

Plabras clave : edicion genetica, CRISPR/Cas9; gliadinas; recombinantes; celiaca  

Introduccion 

          El trigo es una planta perteneciente a la familia de las Poaceae e al género Triticum, una planta de distribución y cultivo, a nivel mundial es uno de los alimentos de mayor importancia y alto consumo en la población, que junto con el maíz y el arroz son los granos más producidos, para el desarrollo de las plantas de trigo es importante que se mantenga una temperatura y sequía moderada, su teor proteico es alto, y su evolución tecnológica proporciono la definición de tipos conforme su uso más adecuado, 90% del que se produce es el trigo farináceo (Triticum aestivum), 5% se constituye del trigo duro (Triticum durum) cuya utilización se da para a fabricación de pastas y 5% de otros tipos (Triticum compactum y otros). ( Manfron. P rew, 1993)

         La harina de trigo es uno de los ingredientes alimentarios más importantes y contiene varios nutrientes esenciales, incluidas las proteínas. El gluten es uno de los principales componentes proteicos del trigo y está formado por glutenina (codificada en el cromosoma 1) y gliadina (codificada en los cromosomas 1 y 6) y hay alrededor de cien genes que lo codifican en el trigo (Rostami-Nejad, M., 2022). Además de variar según las especies en estudio, la importancia de conocer esta proteína es porque a ella se asocian un conjunto de enfermedades denominadas conjuntamente enfermedades relacionadas con el gluten o (GRDs) por sus siglas en inglés.

           Las cuales incluyen la enfermedad celiaca es una enfermedad global que se ha informado en Europa occidental y oriental, América del Norte, América del Sur, Asia, Oceanía y África, En una revisión sistemática y un metanálisis, se estimó que la seroprevalencia global y la prevalencia confirmada por biopsia de la ECe eran del 1,4% y el 0,7%, respectivamente. La seroprevalencia de CeD en los EE. UU. según las Encuestas Nacionales de Examen de Salud y Nutrición (NHANES) fue del 0,7% y, de acuerdo con una variedad de estudios de población de todo el mundo, mostró que la mayoría de los casos permanecen sin diagnosticar en la comunidad (Tye-Din J., 2018).

             Es una enfermedad autoinmune, las personas prepuestas presentan los alelos de los genes HLA-QD2 y HLA-QD8, aun así llevar los genes no implica el desarrollo de la enfermedad, la detección de la enfermedad se realiza a través de biopsias tomadas del intestino donde se demuestren vellosidades atrofiadas, hiperplasia de las crestas, presencia de anticuerpos circundantes específicos, contra la transglutaminasa tisular (tTG), los péptidos de gliadina desamidados (DGP) y el endomisio (Tye-Din J., 2018).

             Además de las complicaciones comunes de la enfermedad, se han realizados estudios que la asocian a otras enfermedades autoinmunes como la diabetes Tipo 1 y el hipertiroidismo, y también se asocia a cáncer en el intestino. 

               Sensibilidad al gluten no celiaca: es una sensibilidad que aún no ha sido 100% dilucidada, la primera persona en hablar sobre esta sensibilidad fue ellis and linkarde en 1978, y estudios recientes han demostrado que los FODMAPs (oligosacáridos, monosacáridos, disacáridos y polioles fermentables) y algunas NGP del trigo, como los ATIs, parecen activar el sistema inmunitario innato y, por lo tanto, desempeñan cierto papel en la sensibilidad No-celiaca según (Leon, S. 2020). 

          En la actualidad no existe ningún tipo de tratamiento para la enfermedad celiaca y las sensibilidades no celiacas, por lo que la única opción recomendable es una dieta libre de gluten de por vida, algunos estudios realizados recientemente, han demostrado que las personas con sensibilidad no celiaca pueden llegar a tener una tolerancia (que difiere para cada persona), al gluten. El aumento creciente de los diagnósticos de estas enfermedades causan un gran impacto económico en las empresas alimenticias y de bebidas que contienen gluten como el pan, la cerveza, alimentos que contiene (cebada, y centeno), también como el aumento en la demanda de alimentos libres de gluten.

                   El desarrollo de cereales desprovistos de epítopos inmunogénicos es una posibilidad muy atractiva. Desafortunadamente este objetivo es casi imposible de alcanzar mediante mejora genética vegetal clásica, debido al alto número de copias de los genes que codifican para las proteínas del gluten y su elevada complejidad. (Leon, S. 2020). Por lo que las estrategias que se abordan para este tipo de mejoramiento no son las herramientas clasicas del mejoramiento vegetal, si no que se abordan tecnicas biotecnologicas mas modernas, tambien la posibilidad de usar variedades de trigo que carecen del gen D, el cual fue denominado tritodeum.

                   Las tecnicas que se han estado intentando abordar para superar las compliaciones que se han presentado son CRISPR/Cas9, y los ARNi con regiones especificas de silenciamiento en secuencias especificas para los ARNm de las gliadinas, segun (Pradanos V., 2012) Los resultados obtenidos muestran que la eliminación de α/βgliadina disminuye la presencia de epítopos que estimulan células T, pero también afecta negativamente a las propiedades tecnológicas de la harina. Sin embargo, la reducción de los niveles de γ-gliadina y ω-gliadina/LMW-glutenina mantiene estas propiedades a la vez que reduce la presencia de epítopos. 

                       CRISPR este sistema fue descrito en 1987 por el investigador de la Universidad de Osaka Yoshizumi Ishino, como parte del sistema de defensa en bacterias, este sistema traba junto con la enzima endonucleasa Cas9, su funcionamiento fue descrito más tarde por francisco mujica en España, donde demostro que CRISPR es usa para el clivaje del ADN exogeno, la cual es guiada por una secuencia de RNA que se parea con el ADN alvo, CRISPR está constituida por sistema palíndromico cortas con secuencias de separación, estos espacios pueden de separación son ocupados por secuencias de los bacteriófagos que más tarde son usados para el reconocimiento y fabricación de un ARN guía que será utilizado para la degradación de AND exógeno de secuencia similar a la del fago con el que estuvo en contacto anteriormente. A partir de estos, CRISPR se volvió una herramienta de interés en la edición de genes, no solo bacteriano, sino que se comenzó a usar para la edición de genes de secuencia conocida, induciendo la ligación con CRISPR para luego obtener el ADN guía para Cas9, y así eliminar, modificar, mutar, o silencia la secuencia del gen alvo.

                       Según (Noriega, D. 2016), el ARN de interferencia (ARNi), es una molécula de ARN de doble cadena, utilizada para suprimir la expresión de genes ampliamente distribuidos en eucariotas, existen diferentes tipos de ARNi, algunos de ellos son miRNA, siRNA que presentan un efecto de ribointerferencia impidiendo la traducción de ARNm a proteínas, estos mecanismos pueden estar presentes de manera endógena en las plantas, la secuencia de ARNi es complementar idéntica o prácticamente idéntica a la secuencia de genética alvo, induciendo el corte directamente a través del complejo RISC, actuando como protector contra patógenos, y transposones. El ARNi se considera una herramienta biotecnológica eficaz para silenciar la expresión de genes de microorganismos fitopatógenos (Gamero, M. 2023). En animales este proceso es más complejo y divergente en el silenciamiento del ARNm alvo. 

                          Materiales y Metodologia 

 Termociclador 

 incubadoras, 

 autoclaves 

 pipetas 

 Electroporador 

 Cartuchos de biolística

  Microproyectiles (generalmente de oro o tungsteno) recubiertos con el miARN. 

 Dispositivo de biolística 

 Tubos de recolección para las semillas bombardeada

  materiales para PCR 

 Secuencia CRISPR

  Enzima Cas9

  Plasmido 

 Tritordeum

  miARNs

  Promotor

  fragmentos de las secuencias de los genes alvo de γ-gliadina y ωgliadina/LMW-glutenina  

        Metodos 

        Inicialmente, la variedad escogida de trigo para la investigación es un cereal derivado del cruce entre una especie de cebada silvestre y un trigo duro del género Tritordeum, ya que a diferencia de otros trigos, este posee únicamente los cromosomas AABB, perdida de los DD por hibridación, por lo que ya presenta una baja expresión de la γgliadina y ω-gliadina, los genes que codifican para estas proteínas pertenecen a los locus Glu-3 y Glu-1 localizados en los cromosomas 1A y 1B.

          La purificación del ADN se realiza por protocolos documentados en (Zerene, M.,2000), y que fue descrito por Saghai-Maroof et al. (1984).

            La secuencias de los microsatélites se obtuvieron a través de la descripción de los mismos en Zerene M. 2000, los cuales serán usados para la síntesis de las secuencias de miRNAs en la técnica de silenciamiento, y las secuencias ARNg para el método de CRISPR/Cas9 

locus de γ -gliadina:

 F1: 5’ - GCA GAC CTG TGT CAT TGG TC -3’ (20-mer) 

R1: 5’ - GAT ATA GTG GCA GCA GGA TAC G -3’ (22-mer) 

locus de ω-gliadina o glutenina de bajo peso molecular (LMWG):

 P1: 5’ - TCC CGC CAT GAG TCA ATC -3’ (21-mer)

 P2: 5’ - TTG GGA GAC ACA TTG GCC -3’ (21-mer)

                    Estas secuencias son amplificadas por tecnica de PCR, los reactivos usados en la tecnica de PCR -Taq DNA polimerase (thermo-stable DNA polimerase), - [ ] de Mg2+ e dNTPs), pode favorecer a interrupção da polimerização, -1-2,5 U/reação de 50 , Em geral são fornecidas conjuntamente com solução-tampão (composição pode varia com o fabricante) e Inibidores da enzima Taq: fenol, Proteinase K, Agentes quelantes em excesso, (EDTA), SDS, elevadas concentrações de sal, primers.

                    Protocolo básico

                 DNA molde 10 - 100 ng, dNTPs 200 μM, Primers (cada) 1 – 10 μM, Tampão 50 mM, MgCl2 2,5 mM, Taq DNA polimerase 1 – 2,5 U.

              Después de una denaturación inicial a 94ºC por 5 min, las muestras fueron amplificadas de acuerdo al siguiente perfil térmico: 30 ciclos de un minuto a 94ºC (denaturación), un minuto de unión de partidores a 55ºC (partidores F1/R1) o 60ºC (partidores P1/P2), y 2 min de extensión a 72ºC.

                 Fabricacion de plasmidos para la introduccion de la secuencia genetica de la enzima Cas9 extraida de Streptococcus pyogenes, y amplificada por PCR, el plamido debe estar provisto de un promotor, la secuencia de ARNg 

5’ - TCC CGC CAT GAG TCA ATC -3 ADN 

5’ – AGG GCG GUA CUC AGU UAG 3’ ARNg

                      Una secuencia marcadora de restincia a antibiotico para diferenciar, y aislar a las celulas que portaran el plasmido. 

                       Inicialmente se digiere el plasmido con enzimas de restriccion endonucleasa en los sitios de interes compatibles con la secuencia del gen codificante para Cas9, ARNg y se juntan con los componentes, que son ligados por una enzima ligasa que compondran el plamido recombinante de interes. 

                La amplificacion y maxificacion de los plasmidos es un proceso realizado en bacterias Agrobacterium tumefaciens las cuales deben ser competentes, los plamisdos se introducen por electroporacion y se ponen a crecer en medio de cultivo por un tiempo de 24horas o hasta que alcance la densidad optica adecuada de 0.6 a 0.8 a 600nm, luego se realiza una caracterizacion por medios electroforeticos.

                       Infeccion de las semillas de tritordeum 

                 Se mezclan las semillas del trigo de mejor calidad y libre de patogenos con la suspencion de A. tumefaciens, incubandolas a una temperatura 20-25 grados temperatura en la que la bacteria tiene una mejor eficiencia de crecimiento, y a una humedad del 80%. 

             Las semillas infectadas se dejan crecer en un medio de cultivo con todos los nutrientes necesarios junto con un antibiotico de seleccion.

ω-gliadina o glutenina de bajo peso molecular (LMWG), por ARNi identificar las secuencias de ADN que se quieren suprimir 

P1: 5’ - TCC CGC CAT GAG TCA ATC -3’ 

P2: 5’ - TTG GGA GAC ACA TTG GCC -3 

ARNm Alvo

 P1: AGG GCG GUA CUC AGU UAG

 P2: AAC CCU CUG UGU AAC CGG 

miARN complementar 

P1: UCC CGC CAU GAG UCA AUC 

P2: UUG GGA GAC ACA UUG GCC

 Luego se amplifican las secuencias de miARN por la tecnica de PCR. 

Finalmente la introduccion de los miARN se realiza por biobalistica 

Preparación de semillas:

 Las semillas de tritordeum deben estar limpias, libres de patogenos y secas antes de comenzar el proceso.

             Se procede a recubrir los microproyectiles con el miARN con oro o tungsteno y se recúbren con el miARN de ω-gliadina. Esto se logra aplicando una solución de miARN a las partículas de microproyectiles y dejando que se sequen. Carga los microproyectiles recubiertos con el miARN en los cartuchos de biolística. Usando una cantidad específica de microproyectiles para cada disparo. Las semillas se colocaran en un soporte adecuado (como una placa de Petri) para facilitar la exposición a los microproyectiles. Fase de bombardeo el soporte con las semillas se coloca en la cámara de bombardeo, se disparan los cartuchos cargados con microproyectiles recubiertos con miARN hacia las semillas.

              Los microproyectiles penetrarán en las células de las semillas, liberando el miARN en el interior de las células. Después del bombardeo, se recoge las semillas bombardeadas y colócalas en un medio de cultivo adecuado para su germinación y crecimiento. Este medio debe proporcionar los nutrientes necesarios para el desarrollo de las plántulas, como lo es el medio de cultivo Medio MS (Murashige y Skoog).

                   Consideraciones finales 

               Las γ- y ω-gliadinas contienen los epítopos principales y clínicamente más relevantes. También se denominan epítopos inmunodominantes, ya que la mayoría de los pacientes con EC que expresan HLA-DQ2. responden a los epítopos, DQ2.5-glia-ω1 y DQ2.5- glia-ω2 (Jouanin, A, 2020), el objetivo de la represion de los genes de las γ- y ωgliadinas por las dos tecnicas descritas CRISPR/Cas9 y ARNi en especifico miRNA, para la obtencion de trigos con un menor impacto toxicos para las personas que presentan sensibilidad del tipo celiaca y no celiaca, segun Rodigo L., 2013, estas líneas podrían servir de base para tratar otras patologías relacionadas con el gluten como son la anafilaxis dependiente de ejercicio físico y la sensibilidad al gluten.

                 En algunos estudios se domostro que las gliadias del tipo γ- y ω pueden ser suprimidos sin causar grandes alteraciones en las propiedades elasticas del trigo, con tritordeum sugiere que este nuevo cereal podría ser tolerado al menos por un subconjunto de pacientes con NCGS que no requieren la exclusión estricta del gluten y que así podrían beneficiarse de sus mejores propiedades organolépticas y nutricionales. Por lo que la edicion de los genes es esta especie podria aumentar el rango de personas que puedan consumirlo.

                   La tecnica CRISPR/Cas9 no es 100% especifica por lo que se deben realizar las pruebas de comprovacion para saber si la tecnica se realizo de manera efectiva, y realizar todos los protocologor de etica y bioseguridad pruebas de laboratorio en cultivos de tejidos que permitan evaluar las caractericas y reacciones de los tejidos en presencia de los granos de trigo modificados.

                   Limitaciones encontradas en la edicion de genes 

             Uno de los retos mas grandes encontrados en la modificacion de variedades de trigo por metodos de supresion de genes es la difícultad para identificar subunidades de G–BPM y gliadinas (complejo loci Glu–3 y Gli–1) en geles de poliacrilamida, en presencia de dodecil sulfato de sodio, debido a la cantidad de genes (35 a 40) que conforman el loci Glu–3 hay ligamiento genético entre las G–BPM (locus Glu–3) y (ω–gliadinas (locus Gli–1), localizadas en el brazo corto de los cromosomas 1A, 1B y 1D.

                  Cronograma 

Actividad                                                                tiempo

Escoger semillas de calidad                                    1 semana  

Adecuacion de las semillas                                       2 semanas 

Purificacion de las secuencia y pruebas de pureza    3 semanas 

Fabricacion de plasmidos recombinantes                   2 semanas 

Amplificacion de los plasmidos en A. tumefaciens,     3 semanas 

Seleccion de colonias recombinantes                           2 semanas

 Pruebas de verificacion de plasmidios recombinantes  1 semana

 Infeccion de las semillas                                              1 semana

 Crescimiento de las plantulas recombinantes               12 semanas

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